YKL-40促进Ⅱ型肺泡上皮细胞A549炎症因子的表达

目的 YKL-40是一种人软骨糖蛋白39或几丁质酶-3样蛋白1,N端由酪氨酸(Y)、赖氨酸(K)、亮氨酸(L)组成,因此被命名为YKL-40.本研究探索YKL-40能否促进Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症因子的表达.方法 体外培养A549细胞,加入IL-1β(20 ng/mL)、IL-6(20 ng/mL)、TNF-α(20 ng/mL)、IFN-γ(20 ng/mL),RT-qPCR检测YKL-40 转录水平的表达;A549细胞中加入5、10、20 ng/mL的IL-1β培养,Western blot检测YKL-40蛋白水平的表达.A549细胞中加入0、100、500、1 000 ng/mL人源重组YKL-40蛋白培养,RT-qPCR检测IL-6、IL-8的表达水平.设计三对靶向YKL-40小干扰RNA(si-YKL-40-1/2/3)和阴性对照(negative control,NC),分别转染A549细胞,RT-qPCR和Western blot鉴定YKL-40的表达,筛选出si-YKL-40-3用于后续实验.在A549细胞中,转染si-YKL-40-3和si-NC后,加入IL-1β(20 ng/mL)培养,RT-qPCR检测细胞YKL-40、IL-6、IL-8表达,QAH-INF-1试剂盒检测上清液中多种因子的表达.结果 RT-qPCR 结果表明,与对照组相比,IL-1β可以上调YKL-40蛋白的转录水平,差异有统计学意义(P<0.01),而IL-6、TNF-α、IFN-γ则不能上调;Western blot结果表明,IL-1β(20 ng/mL)可以显著促进YKL-40的表达,与对照组相比,不同质量浓度IL-1β组差异均有统计学意义(P<0.01).A549细胞中加入人源重组YKL-40蛋白后,炎症因子IL-6和IL-8的表达明显升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);转染si-YKL-40-3降低YKL-40的表达后,与对照组相比,IL-6(P<0.05)、IL-8(P<0.05)等炎症因子表达受到抑制.结论 YKL-40能够促进Ⅱ型肺泡上皮细胞A549表达并分泌IL-6、IL-8等急性期炎性因子,从而加重炎症反应.通过靶向抑制YKL-40的表达可有效抑制炎症反应.