低氧预处理人牙髓干细胞对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经元自噬及ATG7的影响

目的 探讨低氧预处理人牙髓干细胞(hDPSCs)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑神经元自噬及ATG7的影响,为hDPSCs临床应用提供理论依据.方法 2021年6月—2022年9月选取7日龄SD大鼠72只随机分为假手术组(Sham组)、HIBD组、常氧预处理hDPSCs组(N-hDPSCs组)及低氧预处理hDPSCs组(H-hDPSCs组).采用Rice-Vannucci法制备新生大鼠HIBD模型,造模后24h侧脑室移植N-hDPSCs与H-hDPSCs.移植24h后,采用免疫荧光双标染色结合Western Blots检测H-hDPSCs对损伤侧大脑皮层神经元自噬的影响;移植4d,采用苏木素-伊红(hematoxy-lin and eosin stain,HE)染色法和尼氏染色法观察损伤侧大脑皮层组织病理学变化.结果 免疫荧光染色结果示,H-hDP-SCs组与N-hDPSCs组大脑皮层神经元LC3-Ⅱ、Beclin-1、ATG7阳性细胞数量显著低于HIBD组,且H-hDPSCs组显著低于 N-hDPSCs 组(F=326.87、205.87、229.59,P＜0.05);H-hDPSCs 组与 N-hDPSCs 组大脑皮层神经元 P62 阳性细胞数量显著高于 HIBD 组,且 H-hDPSCs 组显著高于 N-hDPSCs 组(F=124.07,P＜0.05).Western Blots 结果示,H-hDPSCs 组与N-hDPSCs组大脑皮层神经元LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平显著低于HIBD组,且H-hDPSCs组显著低于N-hDPSCs组(F=46.949、43.330,P＜0.05).HE染色结果示,HIBD组大脑皮层神经细胞形态不规则,排列不整齐;N-hDPSCs组和H-hDPSCs组大脑皮层神经细胞形态较规则,排列较整齐;尼氏染色结果示,N-hDPSCs组和H-hDPSCs组大脑皮层神经细胞数均较HIBD组增加,且H-hDPSCs组显著高于N-hDPSCs组(F=312.44,P＜0.05).结论 hDPSCs移植可下调HIBD新生大鼠脑神经元自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、ATG7的表达,上调P62的表达,从而抑制自噬,减轻新生大鼠HIBD,促进脑损伤修复,其中,低氧预处理hDPSCs移植的疗效更优.