齐帕特罗残留检测酶联免疫吸附试验方法的建立及优化

为建立检测齐帕特罗(ZIL)残留物的间接竞争酶联免疫吸附试验(ic-ELISA),以获得的抗ZIL兔多抗血清为基础,以制备的完全抗原为包被源,通过优化反应条件,建立了检测ZIL残留物的ic-ELISA检测方法.结果表明,兔血清最佳稀释比例为1∶6 000,抗原最佳包被浓度为2 μg/mL,半数抑制浓度(IC50)为 0.317 ng/mL,线性检测范围(IC20～IC80)为 0.136～1.181 ng/mL,最低检测限(LOD,IC10)为 0.081 ng/mL.经优化后,检测体系最佳pH为7.4,盐浓度≤0.4 mol/L,甲醇、乙醇、丙酮和和DMSO的含量≤5％,乙腈含量≤10％,且检测基质中牛尿液浓度≤15％时能够获得较高的检测灵敏度,并且该检测方法具有良好的稳定性和特异性,批内和批间重复试验样品添加回收率分别为101％～112％和101％～120％,变异系数均低于10％,检测结果与HPLC-MS检测结果的相关系数为R2=0.990 6.该检测方法检测速度快、灵敏度强、准确性高、重复性好、检出限低,适用于ZIL残留的高通量检测和现场快速筛查.