siRNA沉默α-TAT1对肝肺综合征中内皮细胞迁移行为的影响

目的 探究siRNA沉默微管乙酰化转移酶1(alpha tubulin acetyltransferase 1,α-TAT1)对肝肺综合征(hepatopulmonary syndrome,HPS)中内皮细胞迁移行为的影响.方法 通过在线数据库Tabula Muris分析肺组织各细胞亚群α-TAT1的表达.24只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组(Sham组,n=6)、胆管结扎组(HPS组,n=18).造模后在第2、4周分别取材HPS组大鼠,通过免疫荧光共定位检测2周和4周HPS大鼠肺血管内皮细胞中α-TAT1表达水平变化.收集Sham和HPS大鼠血清处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)12 h和24 h,之后进行小分子 RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰实验,分为 Sham 血清+siRNA NC 组、Sham 血清+siRNA α-TAT1 组、HPS 血清+siRNA NC 组、HPS 血清+siRNA α-TAT1 组.Western blot 检测各组HUVECs中α-TAT1、Ace-α-tubulin表达水平变化.免疫荧光观察各组诺考达唑(10 pmol/L)预处理后HUVECs中α-Tubulin微管聚合水平,评估微管的结构稳定性;细胞划痕实验联合细胞免疫荧光观察HUVECs的细胞迁移能力和高尔基体的定位.体外成血管实验检测HUVECs成血管能力.结果 体内及体外实验表明HPS中肺血管内皮细胞α-TAT1表达显著增加(P＜0.01).siRNA α-TAT1干扰组中α-TAT1和Ace-α-tubulin表达量均显著下调,且微管稳定性减弱(P＜0.01).另外,siRNA α-TAT1干扰组中GM130标记的高尔基体在核周细胞突出段方向的分布比例降低,且迁移能力下降(P＜0.01).同时,成血管长度及网络水平显著减弱(P＜0.01).结论 沉默α-TAT1可减弱HPS中内皮细胞迁移和成血管能力,其机制与减弱微管稳定性有关.