目的 探究肠道病毒A71型(enterovirus A71,EV-A71)VP1-E98K突变对人清道夫受体B2敲入(human scavenger receptor class B member 2 knock-in,hSCARB2-KI)小鼠致病性的影响.方法 利用 pSVA-EV-A71-Isehara感染性克隆重组质粒获取拯救的EV-A71 Isehara株,分别在人恶性胚胎横纹肌瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞和转染hSCARB2的RD细胞(RD-hSCARB2)中传代并收获病毒,感染小鼠后建立hSCARB2-KI小鼠感染模型.研究中还采用了感染小鼠的临床评分指标、RT-qPCR、HE染色和免疫荧光技术、ELISA、病毒滴定等方法研究病毒的致病性.结果 用RD细胞中连续传代获得的EV-A71 Isehara株攻击hSCARB2-KI小鼠,未观察到预期的体质量减少、行动迟缓、肢体瘫痪等临床表现;经测序确定该病毒株衣壳蛋白发生了 VP1-E98K突变,故称之为VP1-98K突变株.而野毒型EV-A71 Isehara株(VP1-98E野毒株)感染的hSCARB2-KI小鼠,其大脑、肺脏、骨骼肌组织中病毒载量、组织病理改变、血清中IL-1α、IL-1β、IL-2等水平均高于VP1-98K组,差异具有统计学意义(P＜0.05).细胞学实验发现,经RD细胞传代收获的第5代病毒均检测到VP1-E98K突变,而RD-hSCARB2细胞传代的同代次病毒中则未检测到相应突变,仍为VP1-98E野毒株.结论 VP1-E98K突变显著减弱了 EV-A71对小鼠的致病性.此外,能高表达hSCARB2受体的RD细胞有助于EV-A71 Isehara株的稳定传代增殖,并减少病毒突变机率.
目的 分析碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)T361株的耐药及毒力基因携带情况.方法 肺炎克雷伯菌T361株分离自昆明医科大学第一附属医院干部医疗科患者的痰液标本.采用Vitek-2compact系统对菌株进行鉴定和药物敏感性试验.使用PCR检测菌株的耐药基因.并用Illumina Hiseq 4000高通量测序平台对其进行全基因组测序,分析菌株携带的耐药及毒力基因.结果 肺炎克雷伯菌T361株对头孢菌素类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、氟诺喹酮类、磺胺类、β内酰胺/β 内酰胺酶抑制剂复合物、呋喃妥英及替加环素等抗生素均耐药.PCR检出blaKPC-2、blaTEM、blaSHV及blaCTX等耐药基因.全基因组测序得到1条完整的基因组序列(GenBank 登录号:CP053016)及 4 条质粒序列(GenBank 登录号:CP053017、CP053018、CP053019、CP053020).在染色体基因组中发现,有44种耐药相关基因,包括blaSHV-11、ompK36、ompC、ompK37、lamB等;有50多种毒力基因,包括fimD、mrkC、mrkD、ybtE、ybtT等.在质粒1(pKPN361-1)中发现了 4种耐药基因,包括blaCTX-M-65、blaTEM-1、rmtB和blaKPC-2;质粒 2(pKPN361-2)中发现了 6 种耐药基因,包括 tet(A)、sul1、mphA、aph(3')-Ia、blaLAP-2和aac(3)-Ⅱd;质粒3(pKPN361-3)和质粒4(pKPN361-4)中未检测到耐药基因,并且4个质粒中均未发现毒力基因.结论 碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌T361株中携带了大量耐药及毒力基因且产酶耐药基因位于质粒上,造成其易传播,临床上须引起高度重视.
铝佐剂(aluminum adjuvant)是人用疫苗生产中应用最广泛的一种佐剂,已使用了近百年.随着研究者对铝佐剂的研究深入,人们对铝佐剂的理化性能、吸附效果、吸附后抗原结构及稳定性变化的了解越来越全面.缓冲溶液、pH、离子强度及其他相关辅料影响铝佐剂对疫苗抗原的吸附作用和吸附后抗原结构的稳定性.这些吸附条件的变化对改进疫苗制剂配方、优化疫苗生产工艺提供重要参考.同时,随着多种新型疫苗的研发,疫苗对佐剂的要求越来越高.新型纳米铝佐剂和复合佐剂因具有较高的免疫增强功能成为铝佐剂研究的新方向.现就目前常用铝佐剂的理化性能、铝佐剂对抗原的吸附作用、吸附对抗原结构稳定性的影响及新型铝佐剂的研究作一概述.
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是临床常见的革兰阴性菌之一,分布广泛且可引起多种感染.PA可分泌大量的毒力因子,包括脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、鼠李糖脂(rhamnolipid)、外毒素A(exotoxin A)、蛋白酶(proteinase)、生物膜(biofilm)和Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)等,且PA毒力机制较复杂.在PA感染过程中,群体感应系统(quorum-sensing,QS)和双组分系统(two-component systems,TCS)扮演着重要的角色,调控PA生物膜的形成和毒力因子的产生.现就PA毒力因子的研究进展及调控机制作一概述.
多糖蛋白结合疫苗相对于多糖疫苗成功的关键是其诱导了对于多糖的免疫记忆,增强了机体对病原菌的免疫应答.而结合物的纯度对结合疫苗的效果起着至关重要的作用.纯化方法的选择对于结合物制备的产率和成本具有重要意义,常用的结合物纯化方法种类多样,目前主要使用的纯化方法基于被分离物所带电荷、溶解度、分子大小进行分离纯化.现就这3类常用的多糖蛋白结合物的纯化方法及应用作一概述,为今后的研究提供参考.
