大鼠足细胞的原代培养及鉴定

目的建立一种重复性好、操作简便的大鼠足细胞培养方法。方法取体质量200～220g的健康雌性SD大鼠,无菌取肾后通过差异过筛法分别通过80、150、200目细胞筛网,收集200目筛网上肾小球进行接种,利用植块法将接种培养面向上放置,4.5h后将培养瓶翻转过来正常放置于37℃、5%CO2的恒温恒湿培养箱进行孵育。采用形态学观察和细胞间接免疫荧光技术,对足细胞进行鉴定,并用流式细胞仪进行足细胞纯度分析。结果 5d后可见绝大部分肾小球贴壁并有少许肾小球周围有细胞爬出,7～8d可见所有肾小球周围有大量细胞爬出,胰酶消化后传代培养。形态学及特异性抗体WT-1、nephrin鉴定为足细胞。流式细胞仪分析细胞纯度99%左右。结论差异过筛法分离大鼠肾小球,结合植块法促进肾小球贴壁,可简单、高效地培养出原代足细胞,且具备足细胞生物学特性,且在操作简单的情况下细胞产量、纯度与国外文献报道的相当。