大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳上样量筛选研究

目的:对SD(Sprague Dawley)大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳上样量进行筛选,获得优质凝胶图像。方法:本实验为8月龄SD大鼠,注射戊巴比妥钠麻醉后断头取海马组织,称重后加入裂解液,经过匀浆、孵育、离心等处理后测定蛋白浓度。拟采用银染法凝胶染色时上样量分别为200μg、400μg、600μg、800μg;拟采用考马斯亮蓝染法凝胶染色时上样量分别为1 000μg、1 200μg、1 400μg、1 600μg。采用双向凝胶电泳后,分别采用银染和考染法凝胶染色。染色后凝胶采用Umax PowerLookⅢ扫描仪和photo-shop8.0图像软件进行扫描,采用ETTAN ImageMaster 2D Elite 4.01软件进行图像分析。结果:双向凝胶电泳胶图经扫描分析,蛋白质上样量400μg电泳银染后所获得的胶图蛋白质点区隔明显,背景清晰,经过点识别等处理后获得(756±42)个点;而蛋白质上样量200μg、600μg和800μg电泳银染后获得的胶图蛋白质点较少;蛋白质上样量1 600μg电泳考染后所获得的胶图蛋白质点区隔明显,背景清晰,经过点识别等处理后获得(812±60)个点;而蛋白质上样量1 000μg、1 200μg和1 400μg电泳考马斯亮蓝染法后获得的胶图蛋白质点较少。结论:采用银染法SD大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳上样量为400μg时可以获得良好的凝胶图像;而采用考染法SD大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳上样量为1 600μg时即可获得良好的凝胶图像。