西农萨能羊脂肪酸合酶基因乙酰/丙二酸单酰基转移酶区域重组腺病毒载体的构建

研究旨在通过构建西农萨能羊脂肪酸合酶(FAS)基因乙酰/丙二酸单酰基转移酶(MAT)区域的重组腺病毒载体,为下一步其在奶山羊乳腺上皮细胞中过表达,进一步研究MAT的功能和作用机制做准备.根据GeneBank收录的西农萨能羊MAT序列设计引物,PCR扩增并克隆测序.连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上并线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy1的E.Coli Bj5183感受态细胞进行同源重组,并用Pac Ⅰ酶切鉴定.提取质粒后转化E.coli Top10进行扩繁.将本次克隆的MAT序列与GeneBank收录的序列相比对,在601 bp处,碱基由G转变为A,导致氨基酸序列由从201转变为Thr201.经鉴定并测序分析,试验成功构建MAT基因的重组腺病毒表达载体,可用于下一步病毒包装.