野百合碱诱导大鼠肝窦阻塞综合征模型的病理机制

目的：观察不同剂量野百合碱（MCT）诱导大鼠肝窦阻塞综合征（HSOS）的病理变化，探讨造模剂量-时间致肝损伤的病理特征，并解析其部分作用机制。方法：将72只雄性SD大鼠随机分为正常组（n=12）,MCT低、中、高剂量组（每组n=20）。MCT低、中、高剂量组分别采用MCT 80、120、160 mg·kg-1灌胃一次制备模型，各剂量组大鼠于造模48、120 h处死取材。观测各组大鼠的存活率，检测大鼠体质量、肝质量与血清肝功能变化，采用扫描电镜、苏木素-伊红（HE）染色及天狼星红（SR）染色观察肝组织病理变化，微板法检测肝组织匀浆谷胱甘肽S转移酶（GST）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性、丙二醛（MDA）含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫组化检测肝组织相关指标的表达。结果：与正常组比较，MCT各组血清丙氨酸氨基转移酶/天冬氨酸氨基转移酶（ALT/AST）活性随造模剂量增加而升高（P＜0.05,P＜0.01）；随造模时间增加，MCT低剂量组血清ALT和AST活性均下降（P＜0.01）,MCT中、高剂量组ALT和AST活性均显著升高（P＜0.01）。HE染色显示MCT低、中、高剂量组肝组织肝细胞坏死、炎性细胞浸润及红细胞淤积，电镜下可见肝窦内皮窗孔扩大，“筛状”结构消失，其损伤程度随剂量提高而加重。与正常组比较，MCT低、中、高剂量组肝窦内皮细胞标志物CD44表达减少（P＜0.05,P＜0.01）。SR染色显示造模48 h MCT各组未见阳性染色，120 h MCT各组可见汇管区及肝窦胶原沉积。与正常组比较，MCT各剂量组肝组织MDA含量及GST活性增加，T-SOD活性降低，以MCT中、高剂量组变化显著（P＜0.01）；且造模120 h MCT各组变化呈现剂量依赖性（P＜0.01）。免疫组化及Western blot结果显示，与正常组比较，促炎巨噬细胞标志物CD68蛋白表达随剂量升高而增加（P＜0.01），抗炎巨噬细胞CD163蛋白及mRNA表达随剂量升高而减少（P＜0.01）。与正常组比较，造模后MCT中、高剂量组磷酸化核转录因子-κB/核转录因子-κB（p-NF-κB/NF-κB）、磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B（p-Akt/Akt）明显升高（P＜0.05,P＜0.01）。MCT造模后肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达随时间延长、剂量升高增加，α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白基因α1（Col 1a1）和Ⅳ型胶原蛋白基因α1（Col 4a1）mRNA表达也随时间延长、剂量升高而明显增加（P＜0.05,P＜0.01）。TUNEL染色结果显示造模后凋亡细胞数量随造模剂量升高而增加，B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）蛋白与Bcl-2相关X蛋白（Bax）比值显著降低（P＜0.01）。结论：不同剂量MCT灌胃诱导的大鼠肝窦阻塞综合征，病变随剂量增加而加重。80 mg·kg-1MCT导致的肝脏损伤可自愈，超过120 mg·kg-1的MCT导致的肝脏损伤会随着时间的延长而加重，甚至出现纤维化、死亡。MCT导致大鼠HSOS的病理机制可能是MCT引发肝组织内强烈的氧化应激，激活促炎巨噬细胞大量分泌炎症因子，进而激活NF-κB/Akt信号通路，导致严重的细胞损伤和死亡。