衣原体质粒编码蛋白对衣原体在消化道定植及其耐受胃酸杀伤的作用

目的:初步探索鼠衣原体质粒编码蛋白(pGP)维持鼠衣原体定植在消化道的作用，并分析具体参与鼠衣原体在消化道抵制胃酸杀伤作用的pGP种类。方法:选取6周龄雌性健康C57BL/6J小鼠进行灌胃感染不同剂量的鼠衣原体，包括质粒完整衣原体、质粒缺乏衣原体、质粒缺陷衣原体(pGP3S-CM、pGP4S-CM、pGP5S-CM、pGP6S-CM、pGP7S-CM、pGP8d-CM)。于感染后第3、7、14、21、28、35、42、49、56、63天采集直肠拭子，感染后第3、7、14、21、28天取小鼠消化道不同部位组织(胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠)，离心取上清液，将上清液接种于海拉细胞进行间接免疫荧光染色，荧光显微镜下计数衣原体包涵体，计算组织中鼠衣原体的感染数量。将pH值为1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0的模拟胃酸分别与质粒完整衣原体、pGP3S-CM和pGP4S-CM共同孵育10 min，计算经过不同pH值模拟胃酸杀伤后存活鼠衣原体的数量。统计学比较采用两独立样本 t检验。 结果:采用剂量分别为1×10 3衣原体包涵体形成单位(IFUs)、1×10 4 IFUs、1×10 5 IFUs、1×10 6 IFUs质粒完整衣原体灌胃小鼠后，感染第7至56天小鼠直肠拭子均可检测到质粒完整衣原体，而质粒缺乏衣原体仅在高剂量1×10 5 IFUs和1×10 6 IFUs灌胃小鼠感染后第14天、第7天的直肠拭子中分别被检测到，较质粒完整衣原体在消化道被检出时间明显延迟。采用1×10 5 IFUs质粒完整衣原体灌胃小鼠感染后第3至21天的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠组织中均可检测出衣原体，第28天后局限在盲肠、结肠、直肠，而质粒缺乏衣原体以相同剂量灌胃感染后仅在第14、21、28天的盲肠、结肠、直肠中被检出。pGP3S-CM与pH值为3.0、3.5、4.0、4.5模拟胃酸共同孵育后存活的鼠衣原体数量均低于质粒完整衣原体组，差异均有统计学意义( t＝－0.79、－6.44、－6.99、－6.96，均 P<0.05)，而pGP3S-CM与pH值为5.0~7.0的模拟胃酸共同孵育后存活鼠衣原体数量与质粒完整衣原体组差异无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:鼠衣原体质粒可以促进鼠衣原体在消化道内不同部位组织相互作用，使衣原体存活并长期定植，质粒缺乏使鼠衣原体无法在胃和小肠中定植。其中pGP3、pGP4对于鼠衣原体在消化道定植起主要影响，pGP3参与鼠衣原体耐受胃酸杀伤保证鼠衣原体定植于消化道起关键作用。