利用不同浓度的黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)作用于牛乳腺上皮细胞(MAC-T)培养24 h后,通过相关检测试剂盒检测细胞内氧化损伤标志物活性氧(reacive oxygen species,ROS)、总超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总抗氧化能力(total antioxidation capability,T-AOC)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative poly-merasechain reaction,RT-qPCR)方法检测核因子 E2 相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,NrF2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和 NAD(P)H 醌氧化还原酶(NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO-1)的mRNA相对表达水平;利用蛋白免疫印迹(Western blot)试验检测NrF-2、HO-1和NQO-1的蛋白相对表达水平.结果显示,与0μmol/L相比,10,20 μmol/L AFB1处理组显著升高MAC-T细胞内ROS和MDA的含量,降低SOD、T-AOC和GSH-Px的活性.RT-qPCR结果显示,与0 μmol/L组相比,不同浓度AFB1组显著下调MAC-T细胞中 NrF2、HO-1、NQO-1 的 mRNA 表达水平.Western blot 结果显示,10 μmol/L AFB1 组 MAC-T 细胞中 NrF2、HO-1、NQO-1的蛋白表达水平显著低于0 μmol/L组.结果表明,AFB1通过抑制NrF2信号通路诱导牛乳腺上皮(MAC-T)细胞发生氧化应激性损伤.
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