AKT 信号转导途径在尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨AKT信号途径在尼古丁诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖中发挥的作用。方法（1） Western blot检测不同浓度尼古丁作用原代培养的大鼠气道平滑肌细胞不同时间段，AKT／磷酸化AKT、GSK3β／磷酸化GSK3β在气道平滑肌细胞上的表达水平；（2）细胞分析计数仪检测AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖活性的影响。实验分组：对照组、尼古丁单独作用组、AKT抑制剂LY294002组、AKT抑制剂LY294002＋尼古丁组、GSK3β抑制剂SB216763组、GSK3β抑制剂SB216763＋尼古丁组；（3） EDU摻入法测定AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁处理大鼠气道平滑肌细胞DNA复制活性的影响，实验分组同上。对照组应用1％胎牛血清培养基，各抑制剂和尼古丁应用1％胎牛血清培养基配制，分别在尼古丁加入前30 min应用。结果（1）大鼠气道平滑肌细胞上有AKT和GSK3β的表达；尼古丁引起AKT和GSK3β的快速磷酸化，且尼古丁促进AKT和GSK3β的磷酸化作用具有时间依赖性；（2）细胞计数法显示，AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞计数明显低于尼古丁单独作用组，差异有统计学意义（P＜0．05）；（3）EDU摻入法测定显示，AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞DNA复制水平明显下降，与尼古丁单独作用组相比，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞的增殖作用依赖AKT／GSK3β信号途径。