大鼠海马神经细胞花生凝集素和ConA受体细胞化学技术

本实验应用PNAg和Con Ag细胞化学技术,对大鼠海马神经细胞膜上的相应受体进行凝集素细胞化学反应. 材料与方法:雄性SD大鼠4只,体重250～300g.动物经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,进行心脏灌注固定(固定液为4%多聚甲醛+0.1M PB(pH7.3).动物静置于4℃,3hr后取出大脑,用上述固定液后固定3hr.取具有海马的脑组织,用梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片.PNAg和Con Ag的制备:1)枸橼酸还原法配制 7nm胶体金;2)胶体金分别与PNA和Con A稀释液按一定比例结合;3)超速离心, 4℃,36000/rpm 45分钟;4)收集PNAg和Con Ag结合物,保存备用. PNAg和Con Ag细胞化学反应:切片脱蜡至水后,分别用PNAg液或Con Ag 液混合孵育,37℃,2hr.对照组用D-半乳糖和α-甲基甘露糖作抑制对照试验.细胞化学反应后,切片进行银加强处理. 本实验结果显示,大鼠海马CA区神经细胞PNAg和Con Ag细胞化学明显呈阳性显示,用D-半乳糖和α-甲基甘露糖作抑制对照试验的对照组结果呈阴性显示. 存在于细胞膜上复合多糖末端的糖基常是唾液酸,当细胞表面唾液酸含量出现下降时,其下方的半乳糖胺或甘露糖糖基相对暴露增加.从而可引起细胞在诸如信号转导、分化、凋亡等生物学功能和行为方面产生重要的变化.由于凝集素Con A和PNA是半乳糖基和甘露醇糖基的重要配体,因此,本实验Con Ag和PNAg细胞化学在神经细胞的成功显示不仅在细胞生物学方面,而且在神经生物学研究方面均具有很好的应用前景.