[0001]技术领域
[0002]本发明涉及医学检验领域，特别是涉及用于幽门螺杆菌分离培养的培养基。
[0003]背景技术
[0004]幽门螺杆菌（ Helicobacter pylori ，HP）是重要的胃部感染细菌，能够导致胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃粘膜组织相关淋巴瘤（MALT淋巴瘤）、胃癌等疾病。HP在全世界的平均感染率超过50%，我国感染率达56%。用于幽门螺杆菌检验的方法有多种，包括 13 C/ 14 C尿素呼气试验、快速尿素酶试验、组织染色、血清抗体检测、分子生物学检测方法等。然而，HP分离培养仍然是金标准方法，该方法分离到的菌株可以进一步用于下游相关研究，比如抗菌药物敏感性试验、菌株分型鉴定、毒力鉴定等，因此HP分离培养，是对其致病性及免疫相关性研究中必不可少的。
[0005]在实际工作中，幽门螺杆菌的分离培养非常困难，由于其为兼性厌氧菌，生长条件苛刻，生长速度缓慢，常导致分离培养的失败。目前，国内外尚缺乏专用于HP分离培养的培养基。
[0006]发明内容
[0007]本发明所要解决的技术问题为：提供一种用于幽门螺杆菌分离培养的培养基，该培养基能够高效地从胃黏膜标本中分离到HP菌株，缩短分离培养的时间。
[0008]本发明的技术方案为：一种用于幽门螺杆菌分离培养的培养基，它由以下成分组成：营养肉汤干粉10.0 g/L、蛋白胨5.0 g/L、牛肉膏4.0 g/L、氯化钠3.0 g/L、琼脂20.0 g/L、硫酸亚铁0.6 g/L、β-环糊精0.4 g/L、L-半胱氨酸0.5 g/L、硫酸锌0.6 g/L、脱纤维羊血50.0 mL/L、两性霉素B 10.0 mg/L、万古霉素10.0 mg/L、甲氧苄胺嘧啶5.0 mg/L、多黏菌素B 10.0 mg/L。
[0009]其中营养肉汤（干粉）、蛋白胨、牛肉膏、脱纤维羊血为幽门螺杆菌生长提供营养元素；硫酸亚铁、β－环糊精、L-半胱氨酸、硫酸锌等能提供HP生长的需要的微量元素；两性霉素B、万古霉素、甲氧苄胺嘧啶、多黏菌素B能够抑制真菌、革兰阳性球菌的生长。
[0010]制作过程
[0011]1. 将烧杯置于磁力加热搅拌器上，并加入500mL蒸馏水，加热搅拌，按顺序称量并加入营养肉汤（干粉）10.0g、蛋白胨5.0g、牛肉膏4.0g、氯化钠3.0g、琼脂20.0g、硫酸亚铁0.6g、β－环糊精0.4g、L-半胱氨酸0.5g、硫酸锌0.6g。加入过程中，待前一种试剂彻底融化后再加入后一种。
[0012]2. 以上配制液体冷却至室温，调节pH至7.0～7.2。
[0013]3. 将上一步液体转移至容量瓶中，定容至1000mL，然后进行压力蒸汽灭菌，116℃高压灭菌20min。
[0014]4. 上一步高压灭菌后的液体冷却至50℃左右，加入50mL新鲜脱纤维羊血，加入两性霉素B 10.0mg/L、万古霉素10.0mg/L、甲氧苄胺嘧啶5.0mg/L、多黏菌素B 10.0mg/L，摇动混匀，尽量不要有气泡，然后倒入培养皿中，待冷却凝固后使用。
[0015]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0016]本发明的培养基明显分离效果明显优于血营养琼脂培养基。同时，本发明中培养基幽门螺杆菌菌落生长更加密集和饱满，显微镜下形态更加完整。
[0017]附图说明
[0018]图1是本发明的培养基与血营养琼脂培养基上幽门螺杆菌菌株分离效果图，左为本发明的培养基，右为血营养琼脂培养基。
[0019]具体实施方式
[0020]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的。
[0021]实施例1 本发明方法与常用血营养琼脂培养基对HP分离效果的对比
[0022]选择30例 13 C/ 14 C尿素呼气试验阳性的患者，并具备胃镜适应症条件，在胃镜下取胃黏膜，分别使用本发明培养基和血营养琼脂培养基进行HP培养，对培养阳性率、菌落生长形态等进行对比。
[0023]具体步骤为：
[0024]1、提前将培养基在室温下平衡。
[0025]2、新鲜胃粘膜（或于-80℃下冷冻的胃粘膜），置于研磨器中，加入0.5mL无菌生理盐水，充分研磨。
[0026]3、将上一步研磨后的液体接种于培养基上，并均匀涂布。
[0027]4、将培养基置于三气培养箱中进行培养，每24h小时对培养基进行观察。
[0028]5、对生长出的菌落进行革兰染色镜检和快速尿素酶试验。
[0029]30份胃粘膜标本中，本发明所配制培养基分离到25株HP菌株，阳性率为83.33%；传统血营养琼脂培养基分离到17株HP菌株，阳性率为56.67%；结果显示本发明所配制培养基明显分离效果明显优于血营养琼脂培养基。同时，本发明中培养基幽门螺杆菌菌落生长更加密集和饱满，显微镜下形态更加完整（图1）。
