小豆锈病分子检测体系的构建及应用

YIN Lihua, ZHANG Jinpeng, ZHANG Guoqing, LIU Guohui, KE Xiwang,ZUO Yuhu

Agricultural Research In The Arid Areas（2023）

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摘要

由豇豆单胞锈菌(Uromyces vignae Barclay)引起的小豆锈病是小豆生产中危害最为严重的病害之一,建立早期分子检测技术体系对病害早期诊断和及时防控具有重要意义.本研究以豇豆单胞锈菌ITS序列为依据设计引物,结合已报道的单胞锈菌属特异检测引物,以豇豆单胞锈菌为目标菌,以茄链格孢、茄丝核菌、禾谷镰刀菌、稻瘟菌、苹果轮纹病菌、半裸镰刀菌、玉米链格孢菌、尖孢镰刀菌和禾顶囊壳等 9 种常见植物病原真菌为参照菌,采用CTAB法提取上述各菌株的基因组DNA,应用普通PCR技术筛选出豇豆单胞锈菌的特异性检测引物UV-ITS,在此基础上设计巢式PCR引物UV-MX,构建了基于巢式PCR的高灵敏度小豆锈病分子检测体系.该巢式PCR体系在基因组DNA浓度仅为4×10-6 ng·μL-1时仍可实现有效扩增,其灵敏度是普通PCR的10 万倍.以感病小豆品种'宝清红'接种锈菌后不同时间的叶片为材料检验检测体系的应用效果发现,接种后 12h的小豆叶片样本即可扩增出豇豆单胞锈菌的特异性条带.本研究建立的小豆锈病分子检测体系特异性强、灵敏度高,具备对潜伏期病害进行早期诊断的应用潜力,可为小豆锈病的早期快速诊断和及时防控提供重要的技术支撑.

关键词

Vigna angularis,rust disease,Uromyces vignae,molecular detection,nested PCR

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