血管抑制素和内皮抑制素在大肠杆菌中的融合表达与鉴定

血管抑制素(A S)和内皮抑制素(ES)是两种具有较强活性的内源性血管抑制剂,联合应用具有协同作用。本研究通过大肠杆菌表达A S-ES融合蛋白,观察其对血管生成的抑制作用。首先用RT-PCR方法分别获得A S和ES基因,通过基因拼接获得融合基因,构建了含有该融合基因的原核表达质粒——pET-42(b)/A S-ES。表达菌株经IPTG诱导后目的蛋白以包涵体形式表达,表达量为14%,分子量约65 KD。W estern b lotting检测表明表达产物可分别与A S和ES抗体产生特异的免疫反应。经复性、肝素亲和层析柱纯化的表达产物对鸡胚尿囊膜血管有明显抑制作用。本研究获得了A S、ES在大肠杆菌中的融合表达,目的蛋白具有特异的免疫反应性和血管抑制活性。