一氧化氮对兔纤维环细胞生物学行为的影响

目的:研究一氧化氮(NO)对兔纤维环细胞生物学行为的影响及其相关机制。方法:构建兔纤维环细胞凝胶培养模型并将其为7组,分别向培养基内加入不同浓度的NO供体硝普钠(SNP)及iNOS抑制剂烟酰胺和1400W进行干预:第1组为正常对照组,不加入药物;第2组加入10μmol/LSNP;第3组加入100μmol/LSNP;第4组加入200μmol/LSNP;第5组加入100μmol/LSNP和1μmol/L1400W;第6组加入100μmol/LSNP和0.05mg/mL烟酰胺;第7组加入100μmol/LSNP和0.5mg/mL烟酰胺。干预3d后分别采用MTT法、AnnexinV-PI染色和RT-PCR检测各组纤维环细胞增殖活力、细胞凋亡状况及细胞聚集蛋白多糖(aggrecan)、Ⅰ和Ⅱ型胶原基因表达。结果:①MTT检测显示:第3、4组吸光度值(A)较正常对照组明显下降(均P<0.05),而第5、6、7组均高于第3组(均P<0.05)。②流式细胞仪分析显示:第2、3、4组凋亡细胞比例远高于正常对照组,其中第4组高达32.98%;第5、6、7组凋亡细胞比例较第3组均有所下降,但仍高于正常对照组。③RT-PCR显示:第2、3、4组aggrecan、Ⅰ和Ⅱ型胶原基因表达较正常对照组均明显降低(均P<0.05),而第5、6、7组较第3组均明显增加(均P<0.05)。结论::NO对兔纤维环细胞生物学行为有较强的干扰作用,可能在纤维环损伤机制中扮演着重要角色。iNOS抑制剂可以有效抑制NO对兔纤维环细胞生物学行为的干扰,具备用于椎间盘退变防治的良好潜力。