葡萄穗霉中β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析

以黑曲霉(Aspergillus niger)G1为宿主菌表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)β-葡萄糖苷酶。对葡萄穗霉进行全基因组分析得到编码β-葡萄糖苷酶的基因,设计引物,通过PCR扩增得到g10158,将其克隆到载体pGm上,并转化到黑曲霉G1中,经amdS二次平板筛选,PCR方法验证,获得高效表达该基因的生物工程菌株G1-pGm-g10158-13。SDS-PAGE检测结果显示,表达蛋白的分子大小为87.9 kD,阴性对照中无此条带。粗酶液酶学性质表明,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为50℃,最适pH为4.8。在最适pH和最适温度下,粗酶液活性达1 856.48 U/mL。葡萄穗霉β-葡萄糖苷酶在黑曲霉G1中可表达,并具有较高的活性。