重组BC047440蛋白的表达及其对人肝癌细胞系HepG2增殖的影响

目的构建原核表达载体,制备重组BC047440蛋白并观察不同浓度的重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响。方法提取肝癌组织总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440cDNA,克隆入质粒pMD19-T,转化E.coliDH5α,酶切目的基因片段,插入质粒pET-28a(+),转化E.coliBL21,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物,提取重组BC047440蛋白,MTT法和流式细胞术检测不同浓度重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响,Westernblot检测重组蛋白作用后HepG2细胞表达Ki67蛋白的变化。结果克隆、鉴定BC047440基因,构建其原核表达载体,成功制备并纯化BC047440重组蛋白。1.0、10.0、20.0μg/ml浓度重组BC047440蛋白分别作用HepG2细胞48h后,细胞增殖率分别为124.0%、136.1%、126.6%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术结果提示,对照组的细胞增殖常数(PI)为26.1,重组蛋白处理组PI为48.6,二者差异具有统计学意义(P<0.05)。重组BC047440蛋白作用HepG2细胞后,Ki67蛋白的相对表达量为(0.317±0.062),对照组的相对表达量为(0.177±0.037),二者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论制备的重组BC047440蛋白具有直接促进HepG2细胞增殖和促进其表达Ki67蛋白的作用,可能是一种新的促进肝癌增殖蛋白。