脐血CD34~+细胞向巨核细胞的分化扩增及基因的表达变化

目的 研究脐血CD34~+细胞向巨核细胞的诱导分化及体外扩增,并观察此过程中巨核细胞特异性基因表达的变化.方法免疫磁珠法分离获得CD34~+细胞培养在无血清无基质培养基中,采用TPO+SCF+IL-3+IL-6、TPO+SCF+IL-3、TPO+SCF三种不同因子组合对其诱导分化及扩增.收集3、7、10、14 d的扩增产物,运用荧光显微镜检测巨核细胞的表面标志;流式细胞术(FCM)检测巨核细胞的凋亡;对巨核细胞进行DNA含量检测以及荧光定量PCR检测特异性基因表达的变化.结果分离获得的CD34~+细胞在体外可以有效扩增,随培养时间的延长,CD34~+/CD41~+细胞数第7天达最高值,之后逐渐下降;而CD41~+、CD42b~+、CD61~+细胞随培养时间的延长表达量逐渐增高.DNA含量检测发现,随着培养天数的增加,多倍体细胞所占的百分比增加.三种因子组合中TPO+SCF+IL-3+IL-6组扩增效率最高.荧光定量PCR显示转录因子GATA-1、NF-E2、TXS、GPⅡb和HPRT在第7天表达量最高,之后下降.凋亡转录因子APAF-1随培养天数的延长表达量增加.结论脐血CD34~+细胞在体外可向巨核细胞诱导分化及扩增,其基因表达的变化也支持这一结论.