RNAi沉默STAT3基因对人卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨RNA干扰沉默STAT3基因表达对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用.方法针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建重组质粒(pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3),转染SKOV3细胞进行体外研究;采用Western blot、实时聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学技术检测重组质粒对STAT3基因表达的作用;MTT法检测重组质粒对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)及吖啶橙染色检测重组质粒诱导的细胞凋亡.结果 (1)免疫组织化学技术证实卵巢癌细胞株SKOV3及癌组织中STAT3呈高表达;(2)成功构建pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒,并成功转染SKOV3细胞;(3)MTT法证实重组质粒抑制SKOV3细胞的增殖,流式细胞技术证明重组质粒诱导细胞凋亡;(4)RT-PCR与Western blot分析表明,重组质粒在mRNA及蛋白质水平特异的抑制STAT3的表达;(5)STAT3基因表达的下调抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结论 pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3在人卵巢癌细胞SKOV3中的表达,并抑制肿瘤细胞的生长,促进其凋亡.