一种真核生物染色质隔离子筛选方案的初步建立

目的探讨建立染色质隔离子的正负筛选工具的可行性。方法合成引物从鸡基因组cHS4区域扩增了1段特异的DNA,将PCR产物克隆到T-载体后测序,验证其对增强子的阻断功能;对pEGFP-N1载体进行一系列改造,评价其正负筛选效果。结果成功地获得已知的隔离子片段,初步结果表明该片断能阻断增强子的转录激活作用。将TK基因作为负向筛选标记引入pEGFP-N1载体后获得了改造后的载体,转染COS-7细胞经过G418筛选10d后获得了稳定转染的细胞系,在不同浓度GCV药物作用下细胞杀伤效果有差异。结论正负筛选方法被成功地引入到筛选系统,为进一步进行染色质隔离子的筛选与利用奠定了基础。