1株EV71临床分离株的全基因组序列测定和结构分析及对乳鼠致病性研究

目的利用课题组前期分离获得的EV71临床分离毒株,对其全基因组序列测定及分析,建立EV71感染的动物模型,分析其基因序列与致病性的关系。方法利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE)分段扩增EV71全长基因,对各扩增片段进行克隆和测序;用软件MEGA 5、RNAstructure 5.3进行基因组结构及特点分析;腹腔注射毒株建立EV71感染的ICR乳鼠模型。结果得到3个部分相互重叠并涵盖全基因组的重组质粒,测序后拼接成全基因序列,命名为EV71 BC08株存入GenBank(JQ514785)。序列分析表明BC08株为EV71C4a基因亚型,其5′非编码区(5′UTR)A627点突变可能影响病毒5′UTR二级结构。BC08株能感染乳鼠并导致其出现神经系统症状,病理学研究表明受染乳鼠肌肉和大脑组织有病毒VP1蛋白表达。结论 BC08毒株基因组全长7 406bp,为C4a亚型,与近年我国EV71流行株有很高的同源性(>95%),但A627点突变可能影响病毒5′UTR二级结构及功能。BC08毒株可感染乳鼠并致病,这对该临床分离株的致病能力提供了直接证据,也为建立EV71感染的乳鼠模型奠定基础。