接头连接介导的PCR扩增马铃薯抗晚疫病基因侧翼序列研究

利用接头连接介导的PCR技术,以前期NBS profiling试验获得的1条马铃薯抗晚疫病基因片段为基础,设计巢式基因特异性引物,扩增获得两侧序列。结果表明:基因组DNA经DraⅠ酶切后,在已有536bp片段的左侧和右侧均得到序列延伸,右侧扩增得到2301bp,左侧扩增得到820bp,去除边界序列后,向左延伸789bp,向右延伸2273bp,拼接后共长3443bp。采用GENSCAN进行基因预测,发现包含内含子在内的晚疫病抗性基因全长2413bp,在该预测基因的UTR区域设计特异性引物,在马铃薯抗病和感病的基因型中扩增包含完整基因在内的2571bp序列,发现该特异候选基因与晚疫病抗性相连锁。