豚鼠细胞因子信号抑制蛋白1基因SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立豚鼠细胞因子信号抑制蛋白(SOCS1)SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。方法根据GenBank上公布的豚鼠全基因序列,设计SOCS1全长引物,并在其保守区设计Real-time PCR扩增引物。对SOCS1全长PCR扩增,构建pEASY-Blunt-SOCS1标准质粒。利用10倍梯度稀释标准质粒作为模版,建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果成功建立了标准曲线,相关系数为0.996,扩增效率为103.7%,无非特异性产物和引物二聚体产生,初步应用结果显著。结论本实验建立的豚鼠细胞因子信号抑制蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法可用于细胞因子抑制信号蛋白变化的快速定量检测,能够为禽流感H5N1的研究提供一定的技术支持。