新生奶牛成骨细胞的体外培养、鉴定及生物特性

取新生奶牛肋骨,剪成1 mm3大小骨片,胰蛋白酶消化5次,D-Hank’s液彻底冲洗后,骨片置于含15%FBS的DMEM中培养,获取单层细胞。采用倒置显微镜下观察细胞形态,改良钙-钴法染色,检测碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)mRNA丰度及骨钙素蛋白浓度等方法,对细胞进行鉴定。通过MTT法绘制生长曲线,研究细胞增殖特性,茜素红染色观察细胞钙化功能。结果显示,采用本法所获得的细胞具有典型的成骨细胞形态和特性:ALP染色呈阳性,活性水平较高;培养7 d后可检测到骨钙素mRNA表达,12 d后细胞上清液中可检测到骨钙素蛋白;诱导培养2周后细胞可形成钙化结节。提示采用胰蛋白酶消化,组织块移行法所培养的细胞具有成骨细胞特性。本方法可获得高纯度、高活性的奶牛成骨细胞。