水稻PCR反应体系的正交设计优化及验证

[目的]筛选经济、稳定性好的水稻PCR反应体系,并检测所选体系在不同的基于PCR反应的分子标记中的通用性.[方法]以CTAB法提取的水稻叶片DNA为模板,应用L_(16)(4~5)正交设计进行PCR反应体系优化.[结果]16个不同处理组合均扩增出了清晰谱带,但扩增效果及PCR产量有差异.最经济、适用的体系:20 μl反应体系,20 ng模板DNA,浓度150 μmol/L dNTP,浓度0.2 μmol/L引物,1.0 U Taq DNA 聚合酶,浓度1.5 mmol/L Mg~(2+),1×Taq buffer,剩余体积用超纯水补齐.[结论]试验确定了水稻PCR优化反应体系,该体系也适用于一些其他基于PCR反应的标记.