人源性肺癌噬菌体展示抗体库的构建

目的应用噬菌体展示技术,构建天然人源抗肺癌噬菌体抗体组合文库,筛选能与肺癌细胞特异结合的抗体。方法用RNA提取试剂盒提取淋巴细胞RNA,以Oligo DT为引物反转录合成cDNA,以半套式PCR扩增轻链和重链可变区抗体基因并重组到原核表达载体中,通过噬菌体外壳蛋白形成融合蛋白,形成噬菌体抗体组合文库。结果电泳显示扩增的mRNA有清晰的28s、18s和5.8s的条带,600~700bp片段者为重组克隆;噬菌体展示抗体库大小在108~107之间;优化电转化条件,最终得到库容为1.2×108cfu,双链重组率为41%的抗体库。结论成功构建人源抗肺癌噬菌体展示文库,为下一步筛选具有肺癌细胞特异亲和力的人源性单克隆抗体奠定了基础。