银屑病自然免疫噬菌体单链抗体库的构建及初步验证

目的 构建银屑病自然免疫噬菌体展示全人源单链抗体库,并对其进行抗人肿瘤坏死因子α(Human tumor necrosis factor α,hTNFα)单链抗体的富集筛选.方法 采用间接ELISA法对33例银屑病患者血清进行抗hTNFα IgG分析;利用噬菌体展示技术,以分离的PBLs构建银屑病患者的pComb3X_scFv抗体库,并对其库容量、正确性和多样性进行鉴定;以rhTNFα包被酶标板,经4轮常规的"吸附-洗脱-扩增"进行特异性hTNFα抗体的固相生物淘选.结果 与健康个体相比,银屑病患者具有明显增高的血清抗hTNFα自身抗体(P＜0.01);以此抗体基因资源成功构建出多样性良好的单链可变区噬菌体抗体库,库容量约为4×106,重组率＞90%;经rhTNFα筛选获得了特异性噬菌体抗体的富集.结论 利用构建的银屑病自然免疫噬菌体抗体库可筛选到抗hTNFα特异性单链抗体.