应用双向启动子RNA干扰技术抑制大鼠血管平滑肌细胞MAPK的表达

目的应用双向启动子技术构建针对MAPK的干扰载体,观察其对MAPK表达的影响。方法设计MAPK的干扰序列,构建基于双向启动子的干扰载体pHippy-MAPK,RT-PCR检测大鼠血管平滑肌细胞MAPK转录水平受抑制情况,免疫印迹检测大鼠血管平滑肌细胞MAPK蛋白表达受抑制情况,3H-TdR掺入法检测大鼠血管平滑肌细胞的增殖,免疫沉淀法检测大鼠血管平滑肌细胞MAPK活性。结果构建了针对大鼠MAPK3段序列的干扰载体pHippy-MAPK,并证实其中的1个干扰载体pHippy-MAPK3能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞MAPK的表达。结论基于双向启动子的编号为3的pHippy-MAPK干扰载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞MAPK的表达,为干预MAPK信号途径通路提供了有效手段。