一种带有组氨酸标签的抗糖尿病疫苗的构建、表达、纯化及鉴定

Chinese Journal of Pharmaceutical Biotechnology（2013）

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摘要

利用组氨酸标签系统提高抗糖尿病疫苗HSP65-6P277融合蛋白的产量,简化纯化工艺.通过PCR方法,在融合蛋白HSP65-6P277的N端添加6个组氨酸标签后,定向克隆到pET28a原核表达载体中成功构建了组氨酸标签融合表达载体pET28a-HIS-HSP65-6P277.通过乳糖诱导,融合蛋白HIS-HSP65-6P277在大肠杆菌BL21 (DE3)宿主中以可溶形式表达,镍柱亲和层析纯化后,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明表达产物是约70 k具有6个组氨酸标签肽的融合蛋白；分离纯化融合蛋白的时间从原来的15 ～20 d缩短为2～3d,产量提高到56 mg/L.组氨酸标签系统可以较好的简化抗糖尿病疫苗HSP65-6P277融合蛋白的纯化工艺,提高产量.

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关键词

Escherichia coli,Expression,HIS tag,HIS-HSP65-6P277 fusion protein,Purification,Type 1 diabetes,Vaccine

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