茶叶中甲基化儿茶素的分离、纯化和高效液相色谱法分析

以日本Benifuji绿茶为原料,用50%乙腈提取茶叶有效成分,提取液经氯仿脱咖啡碱和色素、乙酸乙酯和HP-20大孔树脂富集儿茶素,得多酚含量高于80%的茶多酚粗品,再经Toyopear HW-40S柱层析分离纯化,得EGC、ECG、EGCG、EC及两种未知成分.经1 H-NMR、MS和HPLC等分析,两种未知成分为(-)-表没食子儿茶素3-O(3-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3″Me)和(-)-3-O-甲基-表儿茶素没食子酸酯(ECG3′Me).采用TSKgel ODS-100Z色谱柱和二极管阵列检测器(DAD),建立了一种快速、灵敏分析茶叶中儿茶素和甲基化儿茶素的高效液相色谱法.色谱条件: TSKgel ODS-100Z色谱柱,流动相为KH2PO4(pH 2.5)-甲醇系统,采用梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温40 ℃,进样量20 μL.结果表明,6种儿茶素在一定范围内线性良好,相关系数为0.9996～1.0000,平均加标回收率在90.8%～105.9%之间,相对标准偏差均小于3.5%.