虾肝肠胞虫实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

近年来,虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)流行区域不断扩大,已经成为我国南美白对虾(Litopenaeus vannamei)养殖重要病原之一.本研究根据GenBank中虾肝肠胞虫 18S rRNA保守区域设计一套特异性引物和荧光探针,通过优化反应条件,建立检测EHP的TaqMan探针实时荧光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测方法.建立的方法呈良好的线性关系(R2=0.998),灵敏度是巢式PCR的 10 倍.特异性试验表明:检测其他常见病原均为阴性,特异性好;重复性试验显示:批内批间变异系数均小于 1.5％,重复性良好;对临床样品检测,与巢式PCR的符合率为 97.81％.使用该方法对中山市、江门市和珠海市珠三角部分地区南美白对虾开展EHP流行病学调查,其中虾苗检出率为 10.75％,成虾检出率为54.07％,部分区域检出率较高,要防范爆发风险.本研究建立的实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性和重复性良好,具有较好的应用前景.