百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备及ELISA定量检测方法的建立

目的 制备百日咳丝状血凝素(Filamentous hemagglutinin,FHA)单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA法用于检测FHA的含量.方法 采用杂交瘤技术制备FHA单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立FHA双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性验证;应用建立的方法检测本所12批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中FHA的含量.结果 获得4株稳定分泌抗FHA单抗的杂交瘤细胞株,抗体亚型分别为IgG1和IgG2b,抗体腹水ELISA效价达1:105～1:106,均能与FHA发生特异性反应,而与百日咳毒素和流感病毒血凝素未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法的线性检测范围在1.56～100.00ng/ml之间,板内和板间变异系数均小于10%;FHA高、中、低浓度的回收率分别为94.73%、108.67%和116.37%;12批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中FHA的含量在(-X)±2SD范围内比较稳定.结论 已成功制备了抗FHA单抗,并建立了精密性和准确性均较好的定量检测FHA的双抗体夹心ELISA法,可用于无细胞百日咳疫苗生产中间产品中FHA的定量检测.