KGF和EGFP双基因共表达的重组腺病毒转染小鼠骨髓间充质干细胞的研究

为了将角质生长因子(KGF)基因通过腺病毒载体转染到间充质干细胞(MSC)中,增强MSC胸腺修复功能,利用DNA重组技术,将目的基因KGF克隆到含有报告基因EGFP的穿梭质粒中,然后再将构建的重组穿梭质粒转移至pAdxsi载体中,构建重组腺病毒载体质粒,继而在H293细胞中包装、扩增,并测定病毒滴度.转染至小鼠骨髓MSC中,为胸腺组织修复免疫功能恢复提供前期实验基础.结果表明:重组穿梭质粒pShuttle-GFP-mKGF重组穿梭质粒经酶切鉴定得到0.6kh和5.1 kb 2个条带；重组腺病毒载体质粒pAdxsi-mKGF病毒质拉经酶切鉴定得到阳性克隆；测定重组腺病毒Ad-EGFP-mKGF半数组织培养感染量的滴度为1.6×1010 pfu/ml.转染后10 hMSC开始表达荧光,6-8 d达高峰,转染率可达92.3％,28d仍有表达.结论:pAdxsi-mKGF病毒质粒构建成功并能高效、安全地转染MSC.