肝癌中Clusterin的质谱鉴定及其验证

目的 鉴定肝癌患者血清差异表达蛋白并在肝癌细胞和组织中验证肝癌潜在标志物Clusterin的表达水平. 方法 运用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)结合LC-MALDI-TOF/TOF串联质谱技术,分析20例肝癌患者与20例健康对照的血清中差异蛋白的表达水平;用实时定量RT-PCR检测潜在标志物Clusterin在肝癌细胞和30对肝癌和癌旁组织中mRNA表达水平; Western blot检测Clusterin在肝癌细胞中的表达水平.肝癌细胞株与正常肝细胞株均数的比较采用两样本t检验,肝癌组织和癌旁组织均数的比较采用配对t检验.结果 利用iTRAQ结合质谱分析共发现显著差异表达蛋白51个,其中Clusterin在肝癌患者血清中表达下调; RT-PCR结果显示,Clusterin在正常肝细胞中的mRNA表达水平是肝癌细胞中表达水平的20倍(t=-3.482,P=0.0017),癌旁组织中的mRNA表达水平是肝癌组织中表达水平的2.38倍(t=2.840,P=0.0086); Western blot检测Clusterin在肝癌细胞和正常肝细胞中的吸光度值分别为8.06和27.81(t=-3.256,P=0.0015),在肝癌细胞中的表达明显降低.结论Clusterin在肝癌患者血清、肝癌细胞和组织中的mRNA表达水平和在肝癌细胞中表达水平均为下调,其与肝癌的关系值得进一步研究.