曲古抑菌素A对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症细胞因子、Toll样受体4表达及核因子-κB乙酰化的影响

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A (trichostatin A,TSA)对LPS/TLR4/NF-κB炎症信号通路影响的可能机制.以小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象,MTT法检测TSA对巨噬细胞存活率的影响,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,Western Blot检测TLR4蛋白表达及NF-κB/p65(Lys310)的乙酰化程度,应用TransAMTMNF-κB/p65活性检测试剂盒检测NF-κB/p65 DNA结合活性.结果显示,和对照组(DMSO处理)相比,TSA(浓度大于10 ng/mL)处理的细胞存活率显著降低(P＜0.05).LPS处理显著升高培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,而TSA (40 ng/mL)预处理显著降低培养上清中这三种炎症细胞因子含量(P＜0.05).LPS处理显著上调RAW264.7细胞TLR4蛋白表达,而TSA预处理可显著降低TLR4蛋白表达(P＜0.05).LPS处理增强NF-κB/p65(Lys310)的乙酰化和NF-κB/p65 DNA结合活性,TSA预处理进一步增强NF-κB/p65(Lys310)的乙酰化,而降低NF-κB/p65 DNA结合活性(P＜0.05).以上结果提示,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA通过降低TLR4表达以及NF-κB/p65 DNA结合活性发挥其抗炎作用.