葡萄炭疽病可视化LAMP检测体系的建立及应用

[目的]建立葡萄炭疽病LAMP检测方法.[方法]在葡萄炭疽病菌ITS序列片段设计LAMP特异性引物,优化反应条件,建立葡萄炭疽病LAMP检测体系,并利用荧光显色剂(0.05 mmol· L-1钙黄绿素和0.5 mmol· L-1氯化锰混合液)实现检测结果的可视化;同时对该体系进行特异性和灵敏度的验证,对采集自5个地区的田间样品进行实测.[结果]除染病的待检样品有特异性反应,观察到亮绿色荧光信号外,其他供试菌株均无特异性扩增反应;对葡萄发病组织总DNA的检测灵敏分别是定量PCR和常规PCR的1/10和100倍,检测限达到了5×10-4 mg· L-1;对来自福建等5个地区的样品进行实测,结果表明待检样品中有81.5％感染葡萄炭疽病菌,该检测结果与定量PCR的检测结果完全一致.[结论]本研究建立了一种基于荧光显色的可视化LAMP检测体系,该体系可用于葡萄炭疽病的田间样品检测.