融合蛋白TRX-hJagged1原核表达载体的构建及其在BL21中的表达
Zhongguo shi yan xue ye xue za zhi / Zhongguo bing li sheng li xue hui = Journal of experimental hematology / Chinese Association of Pathophysiology（2014）
摘要
本研究旨在构建原核表达载体并原核表达Notch配体Jagged1.构建不同长度但均包含DSL区的原核表达载体pET-hJagged1,将构建重组原核表达载体pET-hJagged1转化大肠杆菌BL21后,予以IPTG诱导,优化诱导条件,使目的蛋白TRX-hJagged1在上清中有较大量表达.诱导工程菌并以镍柱纯化对可溶性的目的蛋白进行纯化.结果表明,成功构建了原核表达载体pET-hJagged1(BglⅡ)、pET-hJagged1 (Hind Ⅰ)及pET-hJagged1(Stu Ⅰ),但仅pET-hJagged1(Stu Ⅰ)表达可溶性的TRX-hJagged1.通过镍柱纯化获得了较单一的TRX-Jagged1蛋白,Western Blot证实了其为目的蛋白.结论:成功地构建了原核表达载体pET-hJagged1,并在原核表达系统表达了TRX-Jagged1融合蛋白,为进一步研究Jagged1在淋巴造血系统中的作用奠定了基础.
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