重组抗菌肽 Cecropin P1在毕赤酵母 X-33中的表达以及纯化后的生物活性分析

为了在毕赤酵母Pichia pastoris表达系统中表达猪源Cecropin P1并分析其生物活性，根据Cecropin P1的氨基酸序列和毕赤酵母的密码子偏嗜性设计引物，通过SOEing法合成全基因片段载入到PpicZαA质粒中，酶切线性化重组质粒PpicZαA-cecropin P1后电穿孔导入毕赤酵母X-33中进行整合，经Zection筛选和PCR检测获得高拷贝的转化子。发酵表达后将表达产物经加热预处理和Sephadex G-25层析及冻干浓缩后，Tricine-SDS-PAGE显示明亮单一条带。采用琼脂扩散法对纯化后的抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性、耐胰酶和胃蛋白酶稳定性进行了生物活性分析，结果表明Cecropin P1具有较强的热稳定性、酸稳定性及胃蛋白酶稳定性，但是在碱性环境下和胰酶作用下抑菌活性明显下降。