日本血吸虫凋亡基因Sjcaspase3的克隆、真核表达及其功能分析
Sheng wu gong cheng xue bao = Chinese journal of biotechnology（2016）
摘要
为深入研究日本血吸虫细胞凋亡机制.利用PCR技术扩增得到Sjcaspase3的全长序列,其ORF含900 bp,编码299个氨基酸,理论分子量为33 509.7 Da,理论等电点为6.39. Real-time PCR分析表明该基因在日本血吸虫生长发育的各个时期均有表达,其中21d表达量最高,42 d雌虫表达量高于42 d雄虫.成功构建了pXJ40-FLAG-Sjeaspase3重组质粒并转染到Hela细胞内,荧光定量PCR和Western blotting分析表明Sjcaspase3成功在Hela细胞中表达.酶活分析提示重组Sjcaspase3具有切割特异性底物天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸(DEVD)的活性.流式细胞术检测了Sjcaspase3可诱导Hela细胞发生早期细胞凋亡.研究结果为深入探讨Sjcaspase3的生物学功能及日本血吸虫细胞凋亡机制奠定了基础.
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关键词
Schistosoma japonicum,apoptosis,caspase3,enzyme activity,flow cytometry
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