抗卡波济肉瘤相关疱疹病毒vIL-6蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备与鉴定抗卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)多克隆抗体,并探讨将其初步应用于检测天然vIL-6蛋白的价值.方法 设计并合成3条vIL-6候选肽,免疫新西兰兔,制备抗vIL-6多克隆抗体,用间接ELISA法鉴定该抗体的效价.构建重组质粒pHAGE-vIL-6并转染293T细胞和EA.hy926细胞,表达并纯化vIL-6-His融合蛋白,通过western blot鉴定抗vIL-6多克隆抗体对该蛋白质的识别.通过western blot和免疫荧光方法检测对KSHV阳性细胞中天然vIL-6蛋白的识别.结果 由3号vIL-6候选合成肽制备的抗vIL-6多克隆抗体效价大于8 000,能特异性识别重组质粒pHAGE-vIL-6转染293T细胞和EA.hy926细胞产生的vIL-6-His融合蛋白,以及天然vIL-6蛋白.结论 本实验采用合成肽作为半抗原制备的抗vIL-6多克隆抗体,可以应用于检测重组和天然vIL-6蛋白.