美洲幼虫腐臭病二温式 PCR 诊断方法的建立及应用

【目的】为建立蜂及蜂产品中美洲幼虫腐臭病(AFB)二温式 PCR 诊断方法。【方法】选取幼虫芽孢杆菌基因保守序列设计一对特异性引物,优化反应参数,进行特异性﹑敏感性和重复性试验验证,建立了诊断AFB 的二温式 PCR 方法。【结果】扩增出130 bp 的特异性片段,与参考株序列相似性为100％,DNA 灵敏度检测幼虫芽孢杆菌达到33 fg∕PCR 体系,重复性良好。应用该方法对40份实验室模拟样本和50份临床样本进行了检测,与预期结果一致。【结论】该方法具有特异﹑灵敏﹑准确等优点,可用于蜂及蜂产品中 AFB 的快速诊断。