日本血吸虫SjOST48基因的克隆、表达及其重组蛋白免疫保护效果分析

为了鉴定日本血吸虫SJCHGC01743基因并评估其重组蛋白作为新的血吸虫病候选疫苗抗原的潜力,利用PCR技术扩增日本血吸虫SJCHGC01743基因,应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的转录水平,以pET-28a(+)为载体构建重组表达质粒并诱导其在大肠杆菌中表达.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备免疫血清,利用Western blotting检测重组蛋白的免疫原性,应用间接免疫荧光技术对SJCHGC01743进行蛋白组织定位,利用间接ELISA方法检测小鼠血清中特异性抗体水平.将重组抗原免疫小鼠,评估其免疫保护效果.PCR扩增得到1 248 bp不含信号肽的cDNA序列,同源性分析结果显示,该基因为日本血吸虫寡糖转移酶OST48亚基,命名为SjOST48.实时定量PCR分析显示SjOST48在检测的童虫和成虫各个期别虫体中均有转录,其中在28 d虫体中的转录水平最高,在42 d雌虫中的转录量显著高于雄虫.构建的重组表达质粒pET-28a(+)-SjOST48成功在大肠杆菌中表达,重组蛋白rSjOST48分子量约50 kDa.Western blotting分析表明rSjOST48能被小鼠免疫血清识别,具有良好的免疫原性,间接免疫荧光实验表明SjOST48蛋白主要分布于虫体体被,少量分布于实质.ELISA检测结果表明rSjOST48能诱导产生较高的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体.动物免疫保护实验结果表明SjOST48能诱导小鼠产生32.62％ (P＜0.05)的减虫率及57.61％ (P＜0.01)的肝脏减卵率.本研究为深入探讨日本血吸虫SjOST48基因的生物学功能及筛选新的血吸虫疫苗候选分子奠定了基础.