沉默RNF181基因表达可促进结肠癌SW480细胞的生长

目的:研究沉默环指蛋白181(ring finger protein 181,RNF181)基因表达对结肠癌细胞SW480生长的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用慢病毒感染的方法将靶向沉默RNF181基因表达的重组慢病毒颗粒LV3-RNF181-KD转入人结肠癌SW480细胞中[以感染重组慢病毒颗粒LV3-negative control (NC)为阴性对照)].病毒感染48 h后,分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测SW480细胞中RNF181mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8法和平板克隆法检测RNF181基因沉默对SW480细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测对细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及其磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)表达的影响.结果:实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,重组慢病毒颗粒LV3-RNF181-KD转入SW480细胞后,细胞中RNF181 mRNA和蛋白的表达水平均较阴性对照组(感染重组慢病毒颗粒LV3-NC的SW480细胞)明显下调,差异均有统计学意义(P值均＜ 0.01).CCK-8及平板克隆实验证实,沉默RNF181基因表达后SW480细胞的增殖能力明显增强(P值均＜ 0.01).细胞中ERK蛋白的表达水平无明显变化(P＞0.05),而p-ERK蛋白的表达水平明显升高(P＜0.01).结论:沉默RNF181基因的表达可增强人结肠癌细胞SW480的增殖能力,其机制可能与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activate protein kinase,MAPK) /ERK信号转导通路的活化有关.