牛型分枝杆菌卡介苗热休克蛋白65(HSP65)基因的克隆、分离纯化及活性研究

为获得大量的牛型分枝杆菌卡介苗热休克蛋白65(HSP65).研究了其发酵条件.分离纯化,并初步考察了其生物活性.应用PCR方法.克隆了HSP65基因,构建高效表达的pET-28a-HSP65重组质粒,转化大肠杆菌BL21.获得HSP65重组基因工程菌E.coli BL21/pET-28a-HSP65.工程菌经乳糖诱导4 h后.重组蛋白HSP65得到高效表达.表达产物经硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose离子交换柱纯化;并初步考察了HSP65的免疫佐剂功能.工程菌在5 mmol/L的乳糖诱导4 h后,产物得到高效表达.经硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose离子交换纯化后可得到电泳纯的HSP65;初步的动物免疫发现.与HSP65偶联的VEGF121免疫原性有所提高.经发酵纯化后得到重组HSP65纯品.初步展现良好的免疫佐剂功能.