腺相关病毒载体介导的VEGF121基因的构建及其在人脐静脉内皮细胞的表达

目的 研究腺相关病毒载体介导人血管内皮生长因子基因(AAV-VEGF121)的体外促血管内皮细胞生长作用.方法 RT-PCR法获取人VEGF121基因,克隆入pAAV-MCS载体中,构建成pAAV-VEGF121(处理组),以空白载体克隆入pAAV-MCS病毒(对照组);两组分别在AAV-293细胞中包装成pAAV-VEGF121病毒颗粒和空白病毒颗粒.相同条件下,两组分别感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),半定量RT-PCR检测细胞内VEGF121基因mRNA的表达;CCK-8法测取OD450nm值,绘制细胞增殖曲线;电子显微镜观察细胞超微结构的改变.结果 成功构建AAV-VEGF121;半定量RT-PCR显示处理组细胞内VEGF121的mRNA表达水平高于对照组(P＜0.01);细胞增殖曲线显示处理组细胞增殖能力明显高于对照组;透射电镜显示处理组细胞内与蛋白质合成有关的细胞器增生明显活跃.结论 AAV-VEGF121基因对血管内皮细胞的生成具有促进作用.