Comparaison de la toxicité de l’amphotéricine B liposomale et désoxycholate sur des cellules épithéliales alvéolaires par mesures de l’impédance cellulaire en temps réel et du niveau d’expression de gènes de cytokines pro-inflammatoires

Introduction Des etudes experimentales et cliniques ont suggere l’interet de l’administration d’aerosols d’amphotericine B pour la prophylaxie de l’aspergillose invasive. La moindre toxicite cellulaire de l’amphotericine B liposomale (L-AmB) par rapport a l’amphotericine B desoxycholate (D-AmB) a ete montree par des tests colorimetriques de viabilite cellulaire en point final. Cependant, ces tests ne peuvent pas mesurer la viabilite de cellules adherentes en culture cellulaire de facon non invasive et en temps reel. Notre objectif etait donc de suivre la viabilite cellulaire en temps reel sur une lignee de cellules epitheliales alveolaires en utilisant une technologie basee sur l’impedance cellulaire et d’etudier le niveau d’expression de genes de cytokines pro-inflammatoires apres exposition a L-AmB ou D-AmB. Methodes Des cellules epitheliales alveolaires A549 ont ete cultivees dans des puits contenant des electrodes (plaques xCELLigence, ACEA Biosciences) permettant des mesures d’impedance en continu. Les resultats sont exprimes en index cellulaires (IC) mesures sur une periode de 100 h, prenant en compte l’adhesion cellulaire aux electrodes et globalisant divers etats biologiques comme la proliferation, la viabilite et la morphologie. Les cellules A549 ont ete ensemencees a une concentration de 18000 cellules/puits et, apres 23 h de culture, les antifongiques (50 a 400 μg/ml de D-AmB ou L-AmB) ou des concentrations equivalentes de liposomes vides ont ete ajoutes en quadruplicat. En parallele, 2 plaques de culture ont ete utilisees pour quantifier l’expression des genes de 2 cytokines pro-inflammatoires (TNF-α et IL-8) 6 h et 24 h apres l’addition des drogues par RT-PCR en temps reel sur les lysats cellulaires. Resultats Une diminution de l’IC a ete observee avec le D-AmB a partir d’une concentration de 50 μg/ml avec une recuperation des cellules a 60 h. Avec des concentrations plus elevees de D-AmB, aucune recuperation cellulaire n’a ete observee. Au contraire, aucune alteration de l’IC n’a ete observee avec le L-AmB ou avec les liposomes vides, meme a 400 μg/ml. Aucune augmentation de l’expression de genes de cytokines n’a ete observee a 6 h, ni avec les liposomes vides, ni avec le L-AmB excepte une induction de 2 fois et de 6 fois de l’ARNm du TNF-α a 200 et 400 μg/ml, respectivement, et une induction de 4 fois de l’ARNm de l’IL-8 a 400 μg/ml. Au contraire, meme avec une faible concentration de D-AmB (50 μg/ml), des inductions de 4 fois et 7 fois du TNF-α et de l’IL-8, respectivement, ont ete observees a 6 h. Conclusions La mesure de l’impedance cellulaire en continu est un outil interessant pour suivre la toxicite cellulaire. La cinetique en temps reel de l’impedance cellulaire et la mesure de l’expression de genes de cytokines pro-inflammatoires ont confirme la meilleure tolerance cellulaire de l’amphotericine B liposomale compare a l’amphotericine B desoxycholate.