融合蛋白TAT-RIG-Ⅰ-GFP的原核表达及其跨膜递送

本研究旨在探讨融合蛋白TAT-RIG-Ⅰ-GFP原核表达载体的构建并验证TAT在跨膜递送中的作用.首先设计了4对特异性引物,克隆了绿头鸭Anas platyrhynchos RIG-Ⅰ基因,构建了pET-TAT-RIG-Ⅰ-GFP和pET-RIG-Ⅰ-GFP原核表达载体;转化至感受态DE3细胞,经IPTG诱导表达,利用His60镍亲和层析柱纯化,进行SDS-PAGE;然后,将纯化后的上述两种表达蛋白分别孵育DF-1细胞;最后利用荧光显微镜观察是否在DF-1细胞产生相应的荧光.结果 证实,携带有TAT的pET-TAT-RIG-Ⅰ-GFP融合蛋白在DF-1细胞中显示出明显的绿色荧光;而不具有TAT的pET-RIG-Ⅰ-GFP蛋白却不能显示绿色荧光.这表明携带TAT的融合蛋白已成功进入DF-1细胞,并在跨膜递送过程中发挥了关键作用.上述为进一步研制家禽的抗病毒药物奠定了基础.