人视黄醇结合蛋白原核蛋白表达和兔多克隆抗体的制备
Xi bao yu fen zi mian yi xue za zhi = Chinese journal of cellular and molecular immunology（2019）
摘要
目的 制备兔抗人视黄醇结合蛋白(RBP)多克隆抗体.方法 逆转录PCR扩增人RBP基因,将扩增产物连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-RBP,转化至大肠杆菌中.用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性克隆,扩大培养.用组蛋白标签(His-tag)纯化柱纯化重组蛋白.将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔,4次加强免疫得到抗血清.从抗血清中纯化出抗RBP多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、ELISA和Western blot法鉴定.结果 成功构建了重组质粒pET-28a(+)-RBP,并获得高纯度的RBP重组蛋白,ELISA检测结果显示抗体效价达到1∶512 000.结论 成功制备兔抗人RBP多克隆抗体.
更多查看译文
AI 理解论文
溯源树
样例
生成溯源树，研究论文发展脉络
Chat Paper
正在生成论文摘要